在 GB 5009.296—2023《食品安全國家標準 食品中維生素D的測定》于 2024 年 3 月 6 日替代 GB 5009.82—2016 中維生素D相關方法后，食品中 25-羥基維生素D?(25-OH VD?，CAS 21343-40-8)與 25-羥基維生素D?(25-OH VD?，CAS 19356-17-3)的 LC-MS/MS 定量成為實驗室標配。天津阿爾塔科技(First Standard®)作為國產穩定同位素標記物與標準品頭部廠商，其維生素系列里圍繞"25-OH VD? / 25-OH VD? + 氘代內標"給出的配套鏈路，基本覆蓋了從食品到臨床血清的兩類場景。
 

　　一、為什么 25-OH VD 檢測離不開"雙標 + 氘代內標"
 

　　維生素D本身在體內半衰期短，臨床與食品營養評價真正看的是其首要代謝物 25-OH VD?/D?。這類分子有三個典型痛點：
 

　　光不穩定性強：醇溶液需避光、-20℃ 以下保存，前處理最好在黃光下操作；
 

　　基質效應大：乳粉、嬰幼兒配方食品、血清中脂類干擾重，必須走同位素內標校正；
 

　　VD? 與 VD? 異構體分離難：依賴 C18 柱甲醇-水/甲酸體系梯度，內標若不用同結構氘代物，回收率會漂。
 

　　GB 5009.296—2023 正文給出的架構是：維生素D?、D? 單標儲備液 → 混合標準使用液 → 加 VD?-d? / VD?-d? 混合內標使用液 → 甲醇定容工作曲線。 阿爾塔的配套思路就是照這條線把"國產純品 + 乙醇/甲醇溶液標 + 自研氘代內標"三件套補齊。
  

　　二、阿爾塔 25-OH VD 產品矩陣拆解
 

　　1. 非標記主體標準品（單標/溶液）
 

　　乙醇中 25-羥基維生素D? 溶液，100 μg/mL，1 mL 安瓿，貨號 1ST1572-100Y-1ML，CAS 21343-40-8；
 

　　乙醇中 25-羥基維生素D? 溶液(對應 CAS 19356-17-3)，同濃度檔可選；
 

　　維生素D?、D? 本體純品及乙醇中 100 μg/mL / 1000 μg/mL 溶液，用于做皂化前的總 VD 折算或方法比對。
 

　　溶劑統一走乙醇中而非甲醇中，貼合 GB 5009.296 對 25-OH VD 溶解性的要求，也方便直接稀釋進甲醇體系工作液。
 

　　2. 穩定同位素標記內標（阿爾塔自研重點）
 

　　阿爾塔公開披露已打通 25-OH VD?-D?、25-OH VD?-D?、25-OH VD?-D?、25-OH VD?-D? 的合成工藝，并按 RM 標準做了均勻性/穩定性研究。 對應 GB 5009.296 正文要求的"VD?-d?(2.00 mg/L)+ VD?-d?(1.00 mg/L)混合內標使用液"，阿爾塔可提供：
 

　　乙醇或甲醇中 VD?-d? 單標(如 100 μg/mL)；
 

　　乙醇或甲醇中 VD?-d? 單標；
 

　　按國標比例預混的 VD?-d? / VD?-d? 混合內標使用液，開瓶稀釋即用。
 

　　氘代位點選在 6,19,19 位(如 VD?-6,19,19-D?，貨號 1ST1573-100Y 同類體系)，保證保留時間幾乎重合、質譜響應因子穩定，又不會在 ESI+ 模式與本體峰共享定量離子。
 

　　3. 維生素大包裝與混標延伸
 

　　在 First Standard® 維生素產品線里，A、D?、D?、E、K?、B 族純品及溶液成系列，25-OH VD 單標可單獨采購，也可走"維生素D族 LC-MS/MS 校準包"形式(含 VD?、VD?、25-OH VD?、25-OH VD?、VD?-d?、VD?-d? 六支)。對同時做 GB 5009.82(VADEK)、GB 5009.158(VK?)、GB 5009.296 的實驗室，直接拿維生素系列大目錄按貨號拼單更劃算。
 

　　4. 臨床血清場景的延伸
 

　　雖然 GB 5009.296 是食品標，但阿爾塔在第四屆北京臨床質譜論壇展示過同源 25-OH VD 氘代內標，可對接臨床血清試劑盒(蛋白沉淀+萃取+復溶方案)。食品實驗室若兼做體檢中心送檢血清，同一批 25-OH VD?/D? 單標 + d? 內標可跨方法復用，只是校準曲線介質從甲醇換成血清空白提取液。
 

　　三、按 GB 5009.296 落地的配制路徑(阿爾塔物料視角)
 

　　以乳粉中 25-OH VD?/D? 檢測為例，用阿爾塔物料走一遍：
 

　　儲備液：取 1ST1572-100Y(乙醇中 25-OH VD? 100 μg/mL)和同檔 25-OH VD? 各 1 mL，按標準反推用乙醇稀成 1000 μg/L 級混合儲備；避光 -20℃ 存。
 

　　混合標準使用液：吸儲備液用甲醇定容到標準規定的 VD? 2000 μg/L、VD? 1000 μg/L 檔(對應 GB 5009.296 的 17.4.5 條)。
 

　　混合內標使用液：取阿爾塔 VD?-d?、VD?-d? 單標，甲醇定容成 VD?-d? 2.00 mg/L + VD?-d? 1.00 mg/L 混合液(-20℃ 避光，1 個月效期)。
 

　　標準系列工作液：6 點曲線(VD?: 20/40/100/200/300/400 μg/L，VD?: 10/20/50/100/150/200 μg/L)，每點加 1 mL 混合內標使用液，甲醇定容，臨用配。
 

　　樣品側：樣品皂化(KOH-乙醇，≤60℃)→ 正己烷萃取 → C18 SPE 凈化 → 復溶時加入與曲線等量的 d? 內標混合液 → LC-MS/MS(C18 2.1×100 mm，甲醇-0.1%甲酸水梯度，ESI+)。
 

　　全程黃光操作，標液瓶鋁箔包裹，避免 25-OH VD 光解導致曲線低點塌方。
 

　　四、選阿爾塔這套方案的幾個實際理由
 

　　氘代內標國產化替代：過去 25-OH VD-d? 靠進口大廠，阿爾塔自研后價格顯著下探，豐度與還原度評審數據可比進口，適合批量送檢的第三方食品實驗室；
 

　　溶劑與國標對齊：主體標給乙醇中、內標可指定甲醇中，不用自己轉溶引入誤差；
 

　　證書鏈完整：每支帶 CoA(HPLC/LCMS/NMR/UV 質控)、ISO17034/ISO17025 體系背書，CMA/CNAS 歸檔直接可用；
 

　　貨號穩定：1ST15xx 系列在儀器信息網、阿爾塔持續在售，換批不換號，SOP 不用重寫。
 

　　五、常見踩坑提醒
 

　　別把"維生素D? 本體標"當"25-OH VD?"用——兩者 CAS、母離子不同(VD? 397.3，25-OH VD? 413.3)，混用曲線全廢；
 

　　d? 內標別用 D? 硬替，GB 5009.296 明文寫 d?，換標記數要重做回收驗證；
 

　　乙醇中單標開瓶后效期按廠家 6–12 個月，但配成甲醇工作液后按國標"臨用前配制"，不要提前一周稀好放自動進樣器過夜；
 

　　血清方法轉食品方法時，內標濃度要按食品標重算，別直接抄臨床試劑盒的 5 μg/L 內標恒濃度。
 

　　小結
 

　　阿爾塔科技在 25羥基維生素D檢測上的配套，本質是"乙醇中 25-OH VD?/D? 單標 + 自研氘代 VD?-d?/VD?-d? 內標 + 維生素大系列純品"的組合拳，既能無縫對接 GB 5009.296—2023 的 LC-MS/MS 外標-同位素內標架構，也能向下兼容臨床血清 25-OH VD 質譜試劑盒。對食品檢測實驗室來說，按 1ST1572 系列主體標 + 指定 d? 內標貨號采購，再嚴格走"乙醇儲、甲醇稀、黃光配、低溫存"，整套量值溯源鏈就立得住了。